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一、色譜柱的堵塞：任何來自流動相或樣品的顆粒物質(zhì)都會污染色譜柱濾網(wǎng)，一些顆粒還可能遷移到柱子填料中，這將導(dǎo)致柱子背壓的增加。這給泵帶來了更大的壓力，并可能導(dǎo)致柱子沉降，產(chǎn)生空隙從而導(dǎo)致峰的分裂。高效液相色譜柱在使用過程中會遇到許多不同的物質(zhì)，如緩沖液中的鹽或流動相和樣品中的雜質(zhì)，這些物質(zhì)可能比被分離的分析物有更少或更多的保留。這些不希望出現(xiàn)的干擾，如果被檢測器觀察到，就會表現(xiàn)為鬼峰、斑點(diǎn)、基線顛倒甚至是負(fù)峰。吸收的雜質(zhì)可能對保留機(jī)制產(chǎn)生負(fù)面影響（縮短保留）或開始作為新的固定相...

1)在pH值正常范圍內(nèi)(2~8)可選用現(xiàn)代高純硅膠色譜柱，具有峰形好，重現(xiàn)性高和壽命長的特點(diǎn)，選用較短的柱子可以提高分離效率，選用較長的柱子可以增加保留，選用小顆粒度的填料可以提高分離度，對分子量大的組分宜選用大孔徑填料的色譜柱。2)分離極性大的組分(流動相水相過大)采用AQ類似的色譜柱。3)分離生物堿類的化合物選用經(jīng)過烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。4)極端酸性條件下(pH小于2)選用寬pH值色譜柱。5)選用含碳量高的柱子可以增加保留。

液相色譜對于實(shí)驗(yàn)室分析員來說是容易上手的儀器了，但就算是經(jīng)驗(yàn)豐富的分析員都會經(jīng)常出現(xiàn)錯誤的操作導(dǎo)致液相色譜儀器發(fā)生故障。而這個(gè)時(shí)候分析員一般就會選擇把色譜柱進(jìn)行反沖這個(gè)方法，但恒譜生在這里建議分析員在一般情況下還是不要反沖色譜柱，除非色譜柱有特別說明是可以反沖的。那么，哪些柱子不能反向沖洗呢？其實(shí)有兩種，一種是兩端柱篩板不一樣是不適合的，因?yàn)槿肟诘哪且欢酥Y板的孔徑比較大會導(dǎo)致固體顆粒物質(zhì)的堵塞，所以一旦進(jìn)行反沖就有可能出現(xiàn)造成填料的流失從而導(dǎo)致分析柱的柱效下降的情況；另一種...

在高效液相分析檢測樣品的過程中，液相保護(hù)柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染，從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差、壽命縮短。來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒，以及流動相系統(tǒng)過濾不全部殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指，未全部溶解的樣品或者已全部溶解的樣品進(jìn)入色譜系統(tǒng)中，由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng)。特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測，因基質(zhì)的復(fù)雜性，色譜柱受污染的情況會更加嚴(yán)重。污染會導(dǎo)...

在正相色譜中，一般采用極性鍵合固定相，硅膠表面鍵合的是極性的有機(jī)基團(tuán)，鍵合相的名稱由鍵合上去的基團(tuán)而定。常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)鍵合相。流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑，如烴類溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等)，以調(diào)節(jié)流動相的洗脫強(qiáng)度。通常用于分離極性化合物。一般認(rèn)為正相色譜的分離機(jī)制屬于分配色譜。組分的分配比K值，隨其極性的增加而增大，但隨流動相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大(或濃度增大)而降低。同時(shí)，極性鍵...

溶劑混合時(shí)氣泡的形成會導(dǎo)致液相色譜分析中的許多問題，這些問題可以通過對流動相進(jìn)行脫氣來避免。當(dāng)溶劑混合時(shí)，空氣的溶解度低于同比例的純?nèi)軇?，過量的空氣會從溶液中析出/冒泡。脫氣是用來描述溶解氣體從溶液中出來的術(shù)語。這種現(xiàn)象也可能發(fā)生在HPLC系統(tǒng)中，其中粗糙的表面會產(chǎn)生氣泡形成的成核位點(diǎn)。由于產(chǎn)生死體積，氣泡還可以改變流動相通過色譜柱的流量。在HPLC分析中，通過對流動相脫氣，可以在很大程度上避免因氣泡形成而產(chǎn)生的問題。一、HPLC系統(tǒng)中的除氣1.低壓混合：低壓混合系統(tǒng)更容易形...