當(dāng)樣品被引入填充有多孔顆粒的色譜柱時(shí)就開(kāi)始液相色譜分離過(guò)程了。樣品被注入并通過(guò)流動(dòng)的液相（流動(dòng)相）輸送通過(guò)色譜柱。當(dāng)分析物遇到固定相時(shí)，它們會(huì)在不同程度上與其相互作用，并分離成可以分析或收集的純區(qū)域。對(duì)固定相具有強(qiáng)親和力的分析物將在色譜柱上停留更長(zhǎng)時(shí)間。

       液相色譜柱的柱效是評(píng)價(jià)色譜性能的一項(xiàng)因素。樣品組分是否能在色譜柱中分離，同時(shí)取決于固定相的選擇、色譜操作條件和填料狀況。一般來(lái)說(shuō)，塔盤(pán)數(shù)越多色譜柱的分離效率越好；或者說(shuō)塔盤(pán)高度越小色譜柱的分離效率越好。今天，恒譜生將討論如何提高 HPLC的柱效。

一、什么是柱效：

       效率是衡量某物效率的指標(biāo)，換句話說(shuō)，它的工作可以做得有多好。對(duì)于色譜柱，效率是指分離的質(zhì)量。高分辨率導(dǎo)致窄峰占用更少的空間，這意味著可以分離更多的峰。這是高效色譜柱的基本定義，它是用平板計(jì)數(shù)理論表示的。

二、什么是塔板計(jì)數(shù)：

      塔板計(jì)數(shù)是列由多個(gè)單獨(dú)的板組成的理論。在分析過(guò)程中樣品通過(guò)色譜柱從一塊板移動(dòng)到另一塊板，在每一步都與固定相相互作用。

三、什么影響柱效：

      塔板計(jì)數(shù)公式提供了一些明確的方法來(lái)增加理論塔板數(shù)從而提高效率。首先是增加保留時(shí)間，這是通過(guò)增加色譜柱長(zhǎng)度來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這樣流動(dòng)相和分析物就需要更長(zhǎng)的時(shí)間通過(guò)。接下來(lái)是底部的峰寬。這是色譜圖中峰開(kāi)始和結(jié)束的點(diǎn)之間的距離。一般來(lái)說(shuō)，這是由色譜分離度決定的。高分辨率會(huì)導(dǎo)致更小的峰寬，而低分辨率導(dǎo)致更寬的峰。影響分辨率的因素有很多，包括色譜柱柱管長(zhǎng)度、粒徑、溫度和體積。然而，這可能只是因?yàn)樯V柱在持續(xù)使用后會(huì)失去其分離能力。

四、提高HPLC柱效可從以下幾個(gè)方面入手：

(1)降低流動(dòng)相流速，但會(huì)增加分析時(shí)間。

(2)固定相用量減少，但色譜柱上樣量也減少。

(3)減小固定相的粒徑，但不能過(guò)多，過(guò)多后色譜柱的滲透性也會(huì)下降。

(4) 采用低粘度的流動(dòng)相有利于快速傳質(zhì)，但不利于多組分分析。

(5)適當(dāng)提高柱溫可以降低流動(dòng)相的黏度，但柱效和分離度也會(huì)降低。

   今天恒譜生分享的知識(shí)先到這啦，希望對(duì)您的工作有所幫助！