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HPLC和GC是已在化學實驗室中站穩(wěn)腳跟的分離技術(shù)。這兩種技術(shù)的基本目的是分離和量化有機混合物的成分。
您有沒有想過為什么HPLC色譜柱比 GC 色譜柱更短更寬。在回答這個問題之前,您應該了解柱長度的好處。
一、柱長:
隨著液相色譜柱長度的增加,洗脫化合物和固定相之間的相互作用時間也會增加,從而提高色譜柱效率和分離度。這導致分離良好的峰。然而,由于柱頭壓力增加和分析時間增加而面臨的實際問題,不能無限增加柱長。
HPLC 色譜柱的尺寸要求取決于分離目標。通常的分析應用要求色譜柱長度為 15 – 25 cm,內(nèi)徑為 4.6 mm,恒譜生的液相分析柱有2.1、3.0、4.0、4.6、7.8內(nèi)徑可選,長度20-250mm不等。
如果追求高效率分析,USHA這一系列色譜柱非常適合您。它提高了速度和分辨率??商峁?0- 300 ?孔徑,1.8、2、3、5、10粒徑的色譜填料。同時有許多不同的固定相可供選擇(C18、C8、苯基、C4、C3、C1、氰基 [CN]、PFP、F-C8 和 C30),建議使用這些色譜柱進行小分子反相分離,是非常耐用的液相分析柱。
制備色譜柱可以更寬,直徑范圍為 20 – 50 mm。恒譜生制備柱從10-50內(nèi)徑不等,長度20-250mm不等,幾乎涵蓋了常用的多種尺寸。即使需要更長的柱管,恒譜生也能提供定制。
二、氣相色譜柱:
氣相色譜柱基本上分為填充柱和毛細管柱。填充柱通常長約 1.5 m 或 6ft,外徑為 1/8" 或 3.2mm。另一方面,毛細管柱長幾米(10-100m)。填充柱由玻璃或不銹鋼制成,而毛細管柱由熔融石英軟管制成。柔性管允許將長柱作為圓形線圈容納到柱溫箱中?,F(xiàn)在檢查兩種技術(shù)在分離過程中的差異,以得出關(guān)于 GC 和 HPLC 柱之間長度差異的基本問題的合乎邏輯的答案。
三、流動相:
流動相的性質(zhì)——首要的原因是被稱為流動相的載液的性質(zhì)。HPLC 使用液體作為樣品通過色譜柱的載體,而在 GC 中,氣流用于攜帶樣品。液體比氣體具有更高的粘度,因此在通過色譜柱時會遇到更大的阻力。色譜柱越長,流動相的流動阻力越大,因此 HPLC 需要更短的色譜柱長度。恒譜生小型化液相色譜柱空柱管總成10X20mm就是專門為需要比較短柱長的客戶研發(fā)。死體積很小,管內(nèi)壁光滑,橫截面均勻呈圓形;保證色譜柱制成品的高性能。
四、樣品:
樣品揮發(fā)性——注入 HPLC 的樣品是液體,而在 GC 中它可以是液體或氣體。但是,在進入 GC 色譜柱之前:由于進樣器模塊中的高溫,液體會轉(zhuǎn)化為蒸氣。氣體在 GC 色譜柱中遇到的阻力較小,這允許使用更長的色譜柱長度。
五、穩(wěn)定性:
樣品穩(wěn)定性——通過 HPLC 分析的樣品通常是熱不穩(wěn)定的,因此它們在 HPLC 柱中在室溫下處于液相。另一方面,進入氣相色譜柱的樣品是具有較低分子量和沸點的氣體。此類化合物在通過色譜柱期間很容易蒸發(fā)并以氣體形式保留。
進一步縮短色譜柱長度,特別是在新的 UHPLC 應用中,導致分析速度加快,靈敏度提高。分析應用的未來趨勢必然是將 HPLC 色譜柱長度和分析時間從幾分鐘縮短到幾秒鐘。