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使用高效液相色譜(HPLC)分析樣品廣泛應(yīng)用于藥物成分分析、食品添加劑測(cè)定和環(huán)境樣品測(cè)試是目前普遍的一個(gè)方法。由于液相色譜柱在許多實(shí)驗(yàn)室中是核心設(shè)備且價(jià)格昂貴,因此保護(hù)其免受損壞是延長(zhǎng)色譜柱壽命和降低成本的首要考慮因素。維護(hù)良好的色譜柱還可產(chǎn)生一致、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),支持可靠的分析結(jié)果。
1.如何提高色譜柱的性能?
色譜柱性能取決于許多因素,包括樣品特性、不溶性顆粒的存在以及使用后的清潔和維護(hù)。然而,并非所有的實(shí)驗(yàn)條件在使用期間都是理想的。例如,一些樣品具有苛刻但必要的pH條件。因此,液體分析柱的預(yù)防性維護(hù)程序有助于最大限度地延長(zhǎng)色譜柱壽命并保持HPLC效率。
2.哪些因素會(huì)影響色譜柱壽命?
常見(jiàn)的HPLC問(wèn)題包括柱背壓增加、泄漏和無(wú)法保持一致的流速。未過(guò)濾樣品或流動(dòng)相中的顆粒會(huì)導(dǎo)致這些問(wèn)題,任何進(jìn)入HPLC系統(tǒng)的物質(zhì)都有可能將顆粒物質(zhì)引入色譜柱基質(zhì),從而縮短色譜柱的使用壽命。因此,樣品必須經(jīng)過(guò)預(yù)處理,使用前也需要用溶劑過(guò)濾器過(guò)濾流動(dòng)相。
流動(dòng)相的過(guò)濾和脫氣將去除微粒和溶解氣體,確保它們不會(huì)到達(dá)并損壞色譜柱。如果流動(dòng)相含有來(lái)自溶解固體材料的緩沖鹽或改性劑,則過(guò)濾尤其重要。泵低壓進(jìn)口側(cè)使用的恒譜生HPLC溶劑進(jìn)口過(guò)濾器有助于保護(hù)止回閥、進(jìn)樣器和色譜柱免受有害顆粒污染物的影響。將此步驟添加到例程中可以幫助減少色譜圖中的基線(xiàn)噪聲。
使用在線(xiàn)過(guò)濾器和保護(hù)柱也有助于防止顆粒進(jìn)入系統(tǒng)和護(hù)柱。色譜柱是液相系統(tǒng)中的一個(gè)關(guān)鍵組件,這些色譜柱保護(hù)器的使用取決于應(yīng)用,需要一個(gè)或兩個(gè)。恒譜生的色譜保護(hù)柱是一種短柱,樣品和流動(dòng)相在進(jìn)入主柱之前通過(guò)該柱,有助于在到達(dá)分析柱之前去除雜質(zhì)和懸浮固體。保護(hù)柱的使用取決于具體應(yīng)用,當(dāng)色譜行為發(fā)生變化時(shí),如背壓、保留時(shí)間或峰加寬的變化,需要定期更換。
實(shí)驗(yàn)中還需要考慮樣品和流動(dòng)相的兼容性,因?yàn)橐恍悠方M分會(huì)與某些溶劑發(fā)生反應(yīng)。例如,醛和酮與氨基流動(dòng)相反應(yīng)。避免反應(yīng)性組合有助于保護(hù)色譜柱免受損壞。